- · 我院到福建对接深化院省科技合作[11/13]
- · 甘肃省小陇山林业实验局来我院对接科技合作[11/13]
- · 中国工程院咨询研究重点项目“林业特色资源加工产业发展战略研究”研讨会在京召开[11/12]
- · 中国林业特色资源加工产业发展战略研究咨询研讨会顺利召开[11/12]
- · 2020年全国林木遗传育种研究生学术研讨会成功举办[11/11]
- · 国家林业和草原局草原研究中心创新与发展研讨会顺利召开[11/05]
- · 中国林科院召开2019-2020年度森林防火经验交流会暨业务培训班[10/30]
- · 中国林科院首次揭示局域群落构建机制[10/29]
杉木实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择
作者: 张颖 [1] 陈婉婷 [1] 陈冉红 [1] 帅鹏 [2] 李明 [2]
关键词: 杉木 荧光定量 内参基因 BestKeeper
摘要:[目的]筛选适用于杉木不同组织荧光定量PCR分析的稳定内参基因,提高杉木实时荧光定量PCR试验准确性,为杉木体内各个基因表达分析提供合适内参基因.[方法]通过实时荧光定量PCR获取GAPDH、EF1α、18S rRNA、28S rRNA、UBQ、UBC与Actin7个候选内参基因在杉木无性系的根、茎和叶中的溶解曲线与Ct值;利用软件geNorm、Normfinder和BestKeeper对候选内参基因的表达稳定性进行评价;通过分析2个纤维素合酶基因ClCesA1和ClCesA2在杉木不同组织部位的相对表达情况,对候选内参基因的稳定性进行验证.[结果]geNorm、Normfinder和BestKeeper分析结果均表明:在杉木根和茎中最稳定的内参基因是EF1α和Actin;geNorm、Normfinder结果显示杉木叶中稳定的内参基因是UBQ和EF1α,BestKeeper显示杉木叶中最稳定合适内参基因是EF1α和Actin.以Actin与EF1α作为内参基因,荧光定量PCR分析表明,ClCesA1和ClCesA2基因的相对表达量在杉木不同组织中均有所不同,ClCesA2的相对表达量在各个组织中均高于ClCesA1.以不同内参基因作为试验内参基因分析ClCesA1和ClCesA2的表达情况得到,ClCesA1和ClCesA2在各个组织中的相对表达量排序主要为茎>叶>根.[结论]7个候选内参基因中,杉木不同组织中稳定表达的为Actin与EF1α,适合作为表达分析的内参基因;28S rRNA的表达稳定性低,不适合作为杉木定量PCR分析的理想内参基因.
上一篇: 叶绿体全基因组序列确定钻天柳在杨柳科中的系统发育位置
下一篇: 冷杉梢斑螟在林芝云杉上的生物学特性